一、農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測抽樣技術(shù)

采樣是選取有代表性的果蔬樣品。應(yīng)根據(jù)樣本種類實際情況確定采樣方法，通常有隨機法、對角線法、五點法、“Z”形法、“S”形法、棋盤式法、交叉法等。應(yīng)避免采有病、過小或未成熟的樣本。取樣本時，需在植株各部位 （上、下、內(nèi)、外、向陽和背陰面） 采取。擦去表面泥土或洗凈后待檢測。

1.1采樣的總體原則

“一三五”原則：

“一”即一個樣品一個袋子，獨立包裝；

“三”即茄果瓜類等大果型蔬菜至少采不同地方的三個；

“五”即葉菜類蔬菜至少采不同地方五棵。

1.2檢測時要從每棵蔬菜上取樣

具體的取樣

①   葉菜類：青菜、小青菜、菜心、菜莧、米莧、生菜、菠菜、蕹菜、大白菜、杭白菜、黃芽菜、空心菜、娃娃菜、雞毛菜、油麥菜、塔菜、芥蘭、草頭、紫角葉、薺菜、蓬蒿、黃心菜、甘藍、卷心菜、牛心菜、菊花菜、芹菜、美芹、水芹、黃心芹、香菜、豆苗、金絲芥、
芥菜、馬蘭、韭菜、韭黃、大蔥、小蔥、大蒜、蒜苗、洋蔥等

葉菜類取1克樣品時，不易太碎，以葉為主。蔥蒜等特殊菜注意假陽性，樣品比對是用標(biāo)準(zhǔn)對照庫。

② 花菜類：花菜、白花菜、青花菜等

花菜類選取3棵樣品，取葉1克（1厘米長寬，不要剪的太碎）。

③ 果菜類：茄子、番茄、青茄、紅茄、辣椒、尖椒、甜椒、杭椒、青椒、黃瓜、西葫蘆、冬瓜、瓠瓜、苦瓜、絲瓜、南瓜、節(jié)瓜、金瓜、佛手瓜、豇豆、刀豆、蕓豆、扁豆、白扁豆、毛豆、蠶豆、豌豆、荷蘭豆等

果菜類可以采取順皮削取1克的方法。具體用帶刮皮器的水果刀順皮削下一片，然后切成1厘米左右見方碎片。

④ 食用菌：蘑菇、香菇、平菇、袖珍菇、金針菇、茶樹菇等

食用菌類可以采取整株浸泡的方法。

二、GB/T5009.199-2003《蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量快速檢測》檢測過程的關(guān)鍵控制點。

2.1標(biāo)準(zhǔn)實施的必要性

我國是農(nóng)藥使用的*大國（年使用量100萬噸以上），由農(nóng)藥殘留引起的食物中毒事故屢有發(fā)生，這主要分為在蔬菜、瓜果上使用高毒農(nóng)藥后，短時間內(nèi)采摘和食用所引起的急性中毒事故和農(nóng)藥殘留量超過zui高允許*（MRL值），長期食用引起的慢性中毒兩種。由于農(nóng)藥品種結(jié)構(gòu)不合理，加上一些人為不合理的使用，以及農(nóng)藥殘留監(jiān)管力度不夠，致使我國農(nóng)藥殘留問題比較突出。

農(nóng)殘超標(biāo)的主要原因：一是生產(chǎn)者不嚴格按農(nóng)藥安全使用準(zhǔn)則的要求進行生產(chǎn),使用違禁農(nóng)藥或使用量和安全期掌握不好。二是施藥器具噴灑的均勻性欠佳,易導(dǎo)致局部給藥超量所致。

由于高毒、高殘留的有機磷農(nóng)藥如：對硫磷、甲基對硫磷、樂果、氧樂果、敵敵畏及甲胺磷等占據(jù)了殺蟲劑產(chǎn)量的70％以上，并且其中70％以上的中毒事故都是由有機磷農(nóng)藥引起的。

2.2標(biāo)準(zhǔn)操作的可行性

酶抑制法是研究zui多且相對成熟的一種對部分農(nóng)藥進行殘留快速檢測技術(shù)。酶抑制法是利用有機磷與氨基甲酸酯類農(nóng)藥可特異性地抑制昆蟲中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中乙酰膽堿酯酶（AChE）的活性，破壞神經(jīng)的正常傳導(dǎo)，使昆蟲中毒致死這一毒理學(xué)原理，將AChE與樣品反應(yīng)，根據(jù)AChE活性受到抑制的情況，可判斷出樣品中是否含有有機磷與氨基甲酸酯類農(nóng)藥。為了提高檢測的靈敏度和準(zhǔn)確度，將提取液用比色法進行分析，從而研制出各種農(nóng)藥殘留快速檢測儀。殘留農(nóng)藥對乙酰膽堿酯酶活性有抑制，濃度越高，抑制率越高。儀器通過測定酶與底物、顯色劑顯色反應(yīng)變色速率，并與空白對照比較求得酶抑制率，從而判定農(nóng)藥殘留量是否超標(biāo)。

2.3標(biāo)準(zhǔn)實施的作用與意義

蔬菜中的水份、碳水化合物、蛋白質(zhì)、脂等物質(zhì)不會對農(nóng)藥殘留物的檢測造成干擾，不必進行分離去雜，節(jié)省了大量預(yù)處理時間，從而能達到快速檢測的目的。因此該方法既具有快速方便、前處理簡單、又無需專業(yè)儀器（設(shè)備相對簡單），適用于現(xiàn)場的定性和半定量測定。

此標(biāo)準(zhǔn)操作簡便、易行、成本低、前期投入少，適合生產(chǎn)基地、市場、超市等進行市場準(zhǔn)入和產(chǎn)地準(zhǔn)出農(nóng)藥殘留初篩快速批量檢測。通過采用現(xiàn)場快速初篩檢測和實驗室驗證性檢測結(jié)合，對結(jié)果陽性的樣品用準(zhǔn)確、可靠的色譜法進行驗證，可大大減少分析工作量，提高分析效率，有利于加強農(nóng)藥殘留監(jiān)控的力度。

2.4檢測過程的關(guān)鍵控制點

① 檢測過程中溫度與提取時間對結(jié)果的影響

以大米為樣品，通過檢測不同溫度、不同提取時間，所得到的抑制率來選擇，所得結(jié)果見圖1和圖2。從圖中可見，樣品的提取溫度在10-30℃范圍抑制率變化較小，高于30℃時抑制率有所降低，而靜置制備樣品提取時間達6分鐘后，抑制率不再增加。

圖.1不同提取溫度對抑制率的影響曲線

圖.2不同提取時間對抑制率的影響曲線

② 關(guān)鍵點假陽性的控制

假陽性的產(chǎn)生：一方面，由于各蔬菜品種間（如：蔥蒜類、香菜、韭菜等容易出現(xiàn)假陽性的蔬菜）對檢測抑制率有不同干擾和影響，使一般的快速檢測方法難以區(qū)分與農(nóng)殘抑制作用的比例關(guān)系容易造成誤判（假陽性）；另一方面，因色素的干擾可能影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。當(dāng)待測樣品的色素（如：葉綠素、胡蘿卜素等）含量較高時，會使測得的透過率非常低，從而造成對吸光度隨時間變化值計算的錯誤，影響檢測結(jié)果的可靠性。

《果蔬農(nóng)藥殘留比對數(shù)據(jù)庫》：2004年，上海博納新技術(shù)研究所與農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督和檢測中心（北京）及中國農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)藥殘留與環(huán)境毒理教研室共同合作，依據(jù)GB/T5009.199-2003的標(biāo)準(zhǔn)，在CL-BⅢ農(nóng)殘快速測定儀的基礎(chǔ)上成功研發(fā)了《果蔬農(nóng)藥殘留比對數(shù)據(jù)庫》，初步解決了應(yīng)用“酶抑制率法+分光光度法”檢測有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留時存在的部分“檢測盲區(qū)”，在一定程度上避免了檢測結(jié)果的假陽性，并實現(xiàn)了檢測過程中對吸收光譜的自動校準(zhǔn)。利用這一科研成果，可使非專業(yè)人員能較快掌握相應(yīng)的操作技能，從而達到復(fù)雜原理與簡易操作的有機統(tǒng)一。

如何處理和避免假陽性？

A．由于果蔬細胞液中存在有抑制膽堿酯酶的物質(zhì)，在檢測取樣時，不要將果蔬樣品切的太碎，以免果蔬細胞液流入檢測液中，影響實驗結(jié)果。

B．大多果蔬由于剪得太碎，或浸提時間過長，使得提取的樣品溶液中，含有較多葉綠素，干擾實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。

C．韭菜、生姜、蔥、辣椒、胡蘿卜等蔬菜中，含有破壞酶活性的物質(zhì)，處理這類樣品時，必要時可采取整株蔬菜浸提。

D．用CL-BⅢ殘留農(nóng)藥測定儀的軟件中，“保存對照”和“裝入對照”的功能，我們能分別建立相應(yīng)果蔬品種的空白對照庫。并能用相應(yīng)果蔬品種的空白對照同該果蔬品種的樣品進行測定。這樣就有可能對如：韭菜、生姜、蔥、辣椒、胡蘿卜等蔬菜進行更好地檢測。

現(xiàn)階段，我國農(nóng)業(yè)上有機磷農(nóng)藥和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的種類有一百多種，質(zhì)量和品種很雜，不宜用氣相色譜方法逐一查出。用CL-BⅢ殘留農(nóng)藥測定儀，能較好地避免假陽性，把好質(zhì)量關(guān)。

三、上海博納農(nóng)藥速測儀的使用注意事項和故障排除。

3.1儀器的維護、保養(yǎng)

① 存放儀器的地方必須保持干燥、防塵、防振動。

② 儀器內(nèi)部通道應(yīng)保持干凈，無灰塵，若有污物，可用棉質(zhì)物拭凈。

③ 儀器操作時，必須注意比色皿通光面不能受到手指或油跡等污染，如有污物或液體可用過濾紙檫凈。

④ 儀器所配套的各個檢測項目所需的輔助設(shè)備、檢測試劑和檢測用品器具。每次檢測完畢后，應(yīng)注意進行維護和保管。

⑤ 禁止在儀器DC輸入孔插入非本公司配套的其他電源。

⑥ 儀器使用前必須先仔細閱讀儀器使用說明書，根據(jù)說明書上的操作步驟進行操作。如儀器出現(xiàn)不正?，F(xiàn)象時，應(yīng)通知銷售商或送到特約維修點維修。用戶不得自行拆卸修理，否則將影響銷售商按照儀器維修條款提供服務(wù)。

3.2常見問題及解決方法

1．儀器開機，為什么液晶屏不亮？

解決方法：檢查電壓如果高于220V，則儀器及其穩(wěn)壓電源可能被燒壞，請更換穩(wěn)壓電源；若更換穩(wěn)壓電源后，仍然無法開機，請將儀器寄送回我公司修理。

2．聯(lián)機操作調(diào)0/100時，無紅線，軟件為何顯示“沒有檢查到的設(shè)備，請檢查儀器連接”？

解決方法：首先檢查儀器與電腦間的數(shù)據(jù)線是否連接好。若連接正常，請檢查儀器是否調(diào)整為“受控工作模式”，然后在食品質(zhì)量安全檢測軟件中的設(shè)備設(shè)置中，選擇相應(yīng)的儀器型號。如果還是不行，則換一臺電腦試試，有可能是電腦的串口出故障。

3．在調(diào)0和100后為何會出現(xiàn)“您調(diào)0/100有誤”，出現(xiàn)800或是更高的紅線？

解決方法：確認是否在調(diào)0時放入黑塊，黑塊拿出時調(diào)100；另外不要在0到100或是100到0的變化過程中，按下0/100鍵。

4．調(diào)0/100時，按下0鍵，或100鍵后，紅線為什么不馬上變?yōu)?span lang="EN-US">0或100？

解決方法：這種現(xiàn)象是正常的，要在調(diào)0/100按“結(jié)束分析”鍵后，重新點擊“開始對照分析”鍵，才會看到0線和100線的數(shù)值變?yōu)?span lang="EN-US">0或100。

5．調(diào)0/100時，數(shù)據(jù)曲線總是為0或其數(shù)值總是在上下飄動，無法穩(wěn)定，是怎么回事？

解決方法：儀器與電腦的數(shù)據(jù)采集線是否連接好；正常聯(lián)接排除后有可能是比色池中的燈泡老化，需要更換燈泡。

6．在使用移液槍時要注意哪些問題？

A．在加入不同的試劑時，一定要用不同的槍頭。

B．在取出試劑后，要檢查槍頭內(nèi)的試劑有無氣泡。

C．在向試管內(nèi)加入試劑時，要保證槍頭與液面垂直,并將試劑全部加入溶液中，而沒有在留在試管壁上。

7．為什么在*檢測儀中做完對照后，在第二檢測儀中做不出樣品測試，總是讓重做對照測試？

解決方法：檢查其它通道中是否裝入對照樣例，點擊“ ”，選擇相應(yīng)通道，點擊“讀取”。

8．為什么做空白對照時紅線的起始值很低？

解決方法：在做標(biāo)準(zhǔn)溶液配置時，加完底物后晃動試管并將溶液倒入比色皿后快速放入比色池，不要過很長時間后再放。檢查比色皿是否由于清潔而影響其透光率，更換新的比色皿或者把不干凈的比色皿放到酒精中浸泡4-5小時，然后用棉球?qū)⑵洳潦酶蓛簟?span lang="EN-US">

9．怎樣的對照才是正常的對照？

解決方法：一般看對照的差值，檢測的時間為3分鐘，則差值應(yīng)該大于8，如果差值偏小達不到要求，則表明試劑中有一樣或幾樣過期，無法使用。

10．如果試劑過期，如何判斷是什么試劑過期？

此問題分幾種情況

A．當(dāng)對照結(jié)束后，對照溶液的顏色沒有什么變化，則表明有可能是酶試劑過期。

B．當(dāng)加入底物后，對照溶液一下子變?yōu)樯铧S色，則表明有可能是底物過期。

C．如果換過一瓶新酶，依然出現(xiàn)A中的現(xiàn)象，則有可能是顯色劑過期。

11．為什么要使用標(biāo)樣庫及如何正確使用。

每種蔬菜都有自己特殊的一種化合物，該化合物對酶的作用和農(nóng)藥對酶的作用是類似的，即：會抑制酶的活性。有些蔬菜本身對酶的活性的抑制作用比較強，而有些則較弱。在所有的蔬菜中有刺激性氣味的蔬菜對酶活性的抑制作用是比較強的，為來更好的消除這種來自蔬菜本身的影響，上海博納新技術(shù)研究所和中國農(nóng)大合作開發(fā)來該標(biāo)準(zhǔn)對照庫，也是全國*一家有此對照庫的廠家。

A．做一標(biāo)準(zhǔn)的空白對照，并且進行保存。

B．按“裝入對照樣例”鍵，打開對照數(shù)據(jù)庫，在選擇“標(biāo)準(zhǔn)對照庫”。

C．在對照上半部分選擇當(dāng)天做的空白對照。

D．在對照庫下半部分選擇所做蔬菜的修正對照。

E．在對照庫的右上角出選擇所要用的通道，并在通道號前打“√”。

F．在對照庫的右下角處按“讀取”鍵完成轉(zhuǎn)入工作。

12．為什么做樣品分析時會出現(xiàn)“采樣點透過率太小”？

解決方法：檢查是否在做樣品分析的時，加入底物后時間過的較長才進行樣品分析。是否樣品本身的沉淀物和雜質(zhì)含量較多，樣品本身的色素干擾作用，是否品種為假陽性——用濾紙或其他方式進行過濾，在“系統(tǒng)設(shè)置”菜單中選種“自動修正色素干擾的檢測結(jié)果”，選擇樣品比對庫。

13．樣品檢測值為何總是偏大？

此問題有數(shù)種可能，請分別檢查下面的步驟是否正確：

A．沒有做空白對照，或用來以前的空白對照。

B．在做樣品溶液時，菜葉剪得太碎，以至于檢測液顏色較深。建議菜葉大小為1厘米見方。

C．檢測液中有懸浮物或渾濁物，使光線無法正常通過比色皿，建議過濾后再檢測。

D．試劑加入的順序錯誤，或漏加某個試劑。試劑加入的順序一定是：酶，顯色劑，底物。

E．比色皿污濁或放入方位錯誤，使光線無法通過比色皿。

F．比色皿外表有水滴使樣品曲線不正常。

14．樣品檢測值為何總是偏小。

此問題有數(shù)個可能，請分別檢查下面的步驟是否正確：

A．沒有調(diào)0和100。

B．制作樣品檢測液時，靜止等待的時間不夠15分鐘。

C．加入酶和顯色劑后等待的時間不夠15分鐘。

15．為什么在做完樣品測試后，電腦沒有直接跳出檢測結(jié)果？

解決方法：“系統(tǒng)設(shè)置”菜單中不要選種的“檢測完成后自動保存檢測結(jié)果”，如選種，檢測結(jié)果就需要在“統(tǒng)計匯總”菜單下的“自動保存檢測數(shù)據(jù)”一欄查看。

16．為什么在數(shù)據(jù)保存時會出現(xiàn)“無法修復(fù)與壓縮數(shù)據(jù)”？

解決方法：由于數(shù)據(jù)庫文件出現(xiàn)損壞，需要重新安裝軟件。平時在做數(shù)據(jù)的過程中盡量多進行備份，以免數(shù)據(jù)丟失。

17．為什么會出現(xiàn)“本機時間快于服務(wù)器時間”，從而導(dǎo)致數(shù)據(jù)無法上傳？

解決方法：把電腦的時間調(diào)整到服務(wù)器時間之后，重新進行上傳。